Resveratrolün Ph+ Akut Lenfoblastik Lösemide Terapötik Potansiyeli ve Resveratrol Tarafından Tetiklenen Apoptozda Seramid Metabolizmasının Rolü

Abstract

Proje ile resveratrolün, Ph+ ALL hücreleri üzerindeki büyümeyi inhibe edici etkisinin_x000D_ arkasında yatan mekanizmalar, seramid metabolizmasının hedeflenmesi ve BCR-ABL_x000D_ ifadesindeki değişimler ile ilişkilendirilerek araştırılmıştır. Resveratrol, SK inhibitörü (SKI II),_x000D_ GSS inhibitörü (PDMP), SPT inhibitörü (Miriosin, Myriocin) ve resveratrol: inhibitör_x000D_ kombinasyonlarının in vitro olarak Ph+ ALL SD1 ve SUP-B15 hücreleri üzerindeki büyümeyi_x000D_ durdurucu ve apoptotik etkileri MTT hücre çoğalması testi, Aneksin-V/PI boyaması, kaspaz3, PARP ifadelerinin ve sitokrom c salınımının belirlenmesi (western blot) ile, sitostatik etki_x000D_ (hücre döngüsü üzerindeki) ise akım sitometresi (PI boyaması) ile araştırılmıştır. Resveratrol_x000D_ ve sfingolipid metabolizması enzimlerini hedefleyen inhibitör kombinasyonlarının BCR-ABL_x000D_ protein ifadesi üzerine etkisi western blot ile belirlenmiştir. Ayrıca, resveratrolün SPT, SK-1/2,_x000D_ GSS protein ifadeleri üzerindeki etkisi western blot ile belirlenmiştir. Her iki hücre hattında_x000D_ resveratrol ve SKI II ve PDMP ile kombinasyonları hücre büyümesini baskılamış, apoptozu_x000D_ tetiklemiş ve hücre döngüsünü S fazında tutmuştur. Resveratrol:Miriosin kombinasyonu ise_x000D_ hücre büyümesi ve hücre döngüsü üzerinde hücreye özgü etkiler gösterirken apoptozu her iki_x000D_ hücrede tetiklemiştir. Her iki hücre tipinde resveratol ve kombinasyonları sitokrom-c_x000D_ salınımını, kaspaz-3 kesimini ve PARP kesimini genel olarak arttırmakla beraber hücreye_x000D_ özgü değişimler de saptanmıştır. Resveratrol her iki hücrede SK-1/SK2 ve GSS ifadesini_x000D_ azaltırken SPT ifadesini arttırmıştır. Resveratrol, SKI II ve PDMP BCR-ABL ifadesini_x000D_ azaltırken Miriosin arttırmıştır. Resveratrol: SKI II ve PDMP kombinasyonları BCR-ABL_x000D_ üzerinde artışlara neden olurken Miriosin ile kombinasyon BCR-ABL ifadesini azaltmıştır._x000D_ Sonuç olarak, resveratrol seramid metabolizmasını ve BCR-ABL ifadesini düzenleyerek Ph+_x000D_ ALL üzerinde hücre büyümesini baskılamış ve apoptozu tetiklemiştir.In this project, it is aimed to identifiy potential mechanisms behind resveratol-mediated_x000D_ growth inhibitory effects in association with targeting of sphingolipid metabolism and_x000D_ regulation of BCR-ABL on Ph+ ALL cells. To investigate the effect of treatment_x000D_ with resveratrol combined with the inhibitors of sphingolipid metabolizing enzymes, SK (SKI_x000D_ II), GCS (PDMP) and SPT (Myriocin), on Ph+ ALL SD1 and SUP-B15 cell growth inhibition_x000D_ and apoptosis in vitro, the cells were incubated with different concentrations_x000D_ of resveratrol and SK, GCS, SPT inhibitors alone and with the combinations of resveratrol_x000D_ and the inhibitors. The cell growth inhibition was evaluated using the MTT assay. Apoptosis_x000D_ was determined using Annexin V/propidium iodide double staining and measuring protein_x000D_ levels of caspase-3, PARP and cytochrome c release by western blot. Cytostatic effects_x000D_ (effects on cell cycle) of each agent alone and combinations were evaluated by PI staining._x000D_ The effects of resveratrol on BCR-ABL, SPT, SK-1/2 and GCS protein expression, and its_x000D_ combinations on BCR-ABL protein expression were checked by western blot. In both cell_x000D_ lines, resveratrol and its combinations with SKI II and PDMP supressed cell growth, induced_x000D_ apoptosis and caused cell cycle arrest at the S phase. However, resveratrol: Myriocin_x000D_ combination showed cell type specific effects on the cell growth and cell cycle progression_x000D_ while induced apoptosis in both cell lines. In general, resveratrol and its combinations_x000D_ triggered cytochrome-c release, caspase-3 and PARP clevage, however, for some cases,_x000D_ there were cell specific responses. Resveratrol supressed SK-1/2 and GCS protein_x000D_ expression while increased SPT expression. BCR-ABL expression decreased after_x000D_ resveratrol, SKI II and PDMP treatment, however, Myriocin caused increases. Resveratrol:_x000D_ SKI II and PDMP combinations increased BCR-ABL expression while resveratrol: Myriocin_x000D_ combination increased its expression level. In conclusion, resveratrol supressed cell_x000D_ proliferation and induced apoptosis through targeting sfingolipid metabolism and modulating_x000D_ BCR-ABL expression.