Cisplatin Temelli Nefrotoksisite Karşıtı Böbrek Hedefli Bir Nanotaşıyıcı Formülasyonu Geliştirilmesi

Abstract

Kitosan doğal bir polimer olup diğer sentetik polimerlere oranla vücutta daha az toksik etki göstermektedir. İyonik jelasyon metodu ile üretilen kitosan sodyum tripolifosfat (TPP) nanopartiküllerin böbrek ve beyin dokusu gibi insan vücut dokuları için iyi bir ilaç salınım araçları olduğu bilinmektedir. Bu çalışmada bir anti-kanser ilacı olan cisplatinin böbreklere oluşturduğu nefrotoksisiteyi gidermek için, gen susturucu siRNA'larla yüklü kitozan-TPP nanoparçacıkları kullanılmıştır. In vitro çalışmalar human kidney cell line olan Hek293 hücrelerinde denenmiş olup nanoparçacıkların hücreye girişleri ise floresan mikroskobu ve flow sitometri ile doğrulanmıştır. MTT ve XTT sonuçlarına göre nanoparçacıkların toksik etkisi düşük bulunmuştur. In vivo çalışmalara bakıldığında ise, balb-c tip 6-8 haftalık farelere siRNA yüklü nanoparçacık enjeksiyonu yapılmıştır. Sisplatin ile muamele edilmiş fareler kontrol ve siRNA-yüklü kitosan nanopartiküller grubu olarak hayvan grupları kullanılmıştır. Sisplatin enjeksiyonlarından sonra, siRNA-nanopartükül verilmesinden sonra farelerdeki kreatinin ve BUN seviyeleri değişimi incelendi. GAPDH bir kontrol geni olup PKC, P53, OCT1, OCT2 ve GGT genleri böbrek proximal tübül hücrelerinde önemli rollere sahiptir. Bu çalışmada bu genlerin mRNA seviyelerine de kantitatif PCR ile bakılmıştır. Enjeksiyonun ilk günlerinde siRNA'lar azalmış iken devam eden günlerde bu etki kaybolmuştur. Böylelikle her siRNA'nın susturma potansiyeli değişkenlik göstermektedir. Fakat bu değişkenlik çalışmada anlamlı bir değişim göstermektedir.

Chitosan is a natural polymer which is less toxic in the body than other synthetic polymers. Chitosan sodium tripolyphosphate (TPP) nanoparticles produced by ionic gelation method are known to be good drug delivery agents for human body tissues, such as brain and kidney. In this study, to eliminate nephrotoxicity in kidney caused by cisplatin, an anti-cancer drug, chitosan-TPP nanoparticles loaded with gene silencing siRNAs were used. In vitro studies have been tested in human kidney cell line Hek293 cells and the toxic effects of nanoparticles were found to be low. The penetration of nanoparticles into the cell was confirmed by fluorescence microscopy and flow cytometry. In vivo studies have shown that nanoparticle injected with siRNA loaded into rats of type 6-8 week in the Balb-c type. Control and siRNA-loaded chitosan nanoparticles cisplatin-treated mice group were used for the animal experiment. After cisplatin injections, creatinine and BUN assays were performed to detect the level changing by nanoparticles after cisplatin-induced siRNA delivery. GAPDH is a control gene and PKC, P53, OCT1, OCT2 and GGT genes have important roles in kidney proximal tubule cells. In this study, mRNA levels of these genes were also examined by quantitative PCR. While siRNAs were decreased in the first days of injection, this effect was lost in the following days. Thus, the silencing potential of each siRNA is variable. However, this variability shows a significant change in the study.