Histon Deasetilaz İnhibitörlerinin PTEN/PI3K/AKT/mTOR Yolağı ve Kemorezistan Kolanjiokarsinoma Gelişimine Olan Etkilerinin Moleküler Düzeyde Belirlenmesi

Abstract

Kolanjiokarsinom (CCA) agresif bir adenokarsinomdur ve ikinci en sık görülen birincil karaciğer tümörüdür. CCA gelişiminin kesin etiyolojisi hala net olarak tanımlanmamıştır. Mevcut kemoterapötik tedaviler, çoklu ilaç direnci nedeniyle etkili olmadığından, kemorezistant CCA yaygındır. Histon deasetilaz inhibitörleri (HDACis); umut verici antikanser karakteri göstermektedir ve HDAC işlevindeki düzensizlikler otofaji için önemli olan ve kemo-dirençli CCA'da bulunan yolaklar ile ilişkilidir, örneğin PTEN/PI3K/AKT/mTOR. Bu nedenle, sisplatine dirençli CCA hücre hatları ürettik ve SAHA, MS-275 ve Romidepsin yoluyla HDAC inhibisyonunun ve Nocodazol ve Klorokin ile otofaji inhibisyonunun etkisini kontrol ettik. Romidepsin ve Nocodazol'ün kombinasyon tedavisi sisplatine dirençli hücrelerin proliferasyonunu azalttı. Apoptotik analiz yapıldı ve sonuçlar erken apoptotik ve apoptotik hücre ölümündeki artışı kanıtladı. Ayrıca, hücre döngüsü analizi sonuçları, hücre döngüsünde durdurulma göstermiştir. Western blotlama ile PTEN, Histon H3 ve Asetillenmiş H3 protein ekspresyonlarını kontrol ettik. Sonuçlar, PTEN ekspresyon seviyesi ile HDAC inhibisyonu arasındaki olası ilişkiyi gösteriyordu. Direnç durumunda PTEN lokalizasyonu çok önemli olduğundan, immünofloresan boyama gerçekleştirdik ve hem hassas hem de sisplatine dirençli hücrelerde PTEN'in yerini tespit ettik. Sonuçlar, sisplatine dirençli hücrelerinde sitoplazmaya PTEN translokasyonunu gösteriyordu. Sonuç olarak, HDAC ve otofaji inhibisyonunun kombinasyon tedavisi, kemorezistan kolanjiokarsinomaya karşı umut verici bir tedavidir.

Cholangiocarcinoma (CCA) is an aggressive adenocarcinoma and the second most common primary liver tumor. The precise etiology of the development of CCA is still not clearly defined. Since the current chemotherapeutic treatments are not effective because of the multidrug resistance, chemoresistant CCA is prevalent. The histone deacetylase inhibitors (HDACis) have shown promising anticancer properties and dysregulation of HDAC related to pathways in chemoresistance CCA such as PTEN/PI3K/AKT/mTOR which is important for autophagy. Hence, we generated cisplatin-resistant CCA cell lines and investigated the effect of HDAC inhibition by SAHA, MS-275, and Romidepsin and autophagy inhibition by Nocodazole and Chloroquine. The combination treatment of Romidepsin and Nocodazole has decreased the proliferation of cisplatin-resistant cells. The apoptosis assay has been performed, the result has been proved the increase in early apoptotic and apoptotic cell death. Also, cell cycle analysis results have shown apparent cell cycle arrest. We checked the protein expression level of PTEN, Histone 3 (H3), and Acetylated H3 by western blotting. The results were showing the possible association between the PTEN protein expression and HDAC inhibition. Since the PTEN localization is crucial in the case of resistance, we detected the localization of PTEN in sensitive and resistant cells. Outcomes were showing the PTEN translocation to the cytoplasm in cisplatin-resistant cells. In conclusion, combination therapy of HDAC and autophagy inhibition is may be a promising therapy against chemoresistant cholangiocarcinoma.